马明远¹乔海燕²陈成³

（1.上海伍丰科学仪器有限公司2.安徽皖测食品检测技术有限公司3.上海市食品研究所）

摘要：使用上海伍丰科学仪器有限公司的EX1700型超高效液相色谱仪在安徽皖测食品检测技术有限公司开展应用，检测食品中合成着色剂，方法研究表明：线性满足大于R²＞ 0.9990，保留时间重复性其RSD≤3.0%，检出限满足有关国家标准的要求，仪器工作站操作简便，可以满足日常食品安全检测的需求。EX1700型超高效液相色谱仪配置自动进样器，节省了实验室人工时间，提高了工作效率；特别是该仪器能够承受最高80兆帕压力，因此可以将流速提高至1.5~2ml/min，本方法中即使采用1ml/min流速，检测时间（14min）仍比普通液相色谱仪检测时间（30min）节约一半，因此工作效率和灵敏度较普通液相大幅提高。

合成着色剂又称食用色素是用于食品加工生产过程中的食品添加剂，使食品着色，从而改善食品色调和色泽。五彩缤纷的合成着色剂使人赏心悦目，刺激人们的食欲，是食品生产中不可缺少的重要组成部分。常用的合成着色剂有：胭脂红、柠檬黄、苋菜红、亮蓝，日落黄、靛蓝、诱惑红等，合成着色剂是以苯、甲苯、萘等化工产品为原料，经过磺化、硝化、卤化、偶氮化等一系列有机反应制成合成着色剂，合成着色剂有一定毒性，过多食用会危害人体健康，但由于人工合成着色剂成本低、色泽鲜艳、着色力强、色调多样，故被广泛使用。合成着色剂有严格的控制使用范围和最大使用量，因此食品中合成色素的准确测定具有重要意义。

1试验部分

1.1仪器与试剂

超高效液相色谱仪（上海伍丰 EX1700型），分析天平（梅特勒特利托 BP211D），离心机，氮吹仪、涡旋振荡器。

甲醇（色谱级）、乙腈（色谱级）、乙酸铵（色谱级）、盐酸（分析纯）、甲酸（分析纯）、氨水（分析纯）、乙醇（分析纯）、丙酮（分析纯）、水、尼龙66。

1.2色谱条件

色谱柱：Shodex 120-5-4E C18，4.6*250mm，5um

流动相：A：0.02mol/l乙酸铵水溶液；B：90%甲醇水溶液，梯度洗脱

流速：1ml/min

进样量为20ul

梯度方法

波长程序

1.3标准溶液准备

准确称取标准品的柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝各1.000g，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，配制成1000ug/ml储备液。

临用时将储备液用水稀释至0.1，0.2，0.4，1.0,，3.0，5.0ug/ml的系列溶液，经0.45微孔滤膜过滤，作为待测溶液。

1.4   样品溶液准备

在50ml离心管中称取2g样品，加入15mL丙酮水溶液（丙酮：水=1：1），震荡提取，转入离心机4000r/min离心，将上层丙酮水溶液倒入100mL烧杯中，分别提取三次，合并提取液，置于水浴锅中蒸干。

往上述烧杯中加入甲醇水溶液10mL（甲醇：水=10：90），震荡溶解合成着色剂，将溶液加入聚酰胺SPE柱，吸附完毕后，用甲酸水溶液（甲酸：水=10：90）清洗聚酰胺SPE柱，抽干；加入10mL氨水乙醇溶液（氨水：乙醇=10：90）洗脱合成着色剂，洗脱液蒸干。

用2.00mL甲醇复溶解合成着色剂，过滤待测。

2结果与讨论

2.1波长选择

我们比较了各检测波长条件，相同浓度各个组分的响应情况，发现拧檬黄、苋菜红在254nm下响应更好；日落黄、诱惑红、亮蓝在波长程序条件下响应更好，尤其是亮蓝，响应值提高了10倍以上；靛蓝、胭脂红在两种条件下响应差别不大（如图1、图2）。因此，最后选择在254nm下检测拧檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红，待其出峰之后再改变波长检测日落黄、诱惑红、亮蓝（如图3）。

图1 检测波长254nm条件下7种着色剂的色谱图（浓度10ug/ml）

图2 参考GB/T 21916-2008波长程序条件下7种着色剂的色谱图（浓度10ug/ml）

图3波长程序条件下7种着色剂的色谱图（浓度5ug/ml）

2.2分别进不同浓度样品，用保留时间考察其重复性，结果见表1。表2为不同浓度各组分的峰面积，根据峰面积和浓度作线性回归，得到标准曲线和相关系数（图4），线性关系良好。

表1 保留时间重复性

表2 不同浓度组分峰面积

图4 7种着色剂标准曲线

柠檬黄：y = 6034.8x - 80.327R² = 0.9997

苋菜红：y = 4047.4x + 24.426R² = 0.9993

靛蓝：y = 3496.1x - 20.141R² = 0.9999

胭脂红：y = 4501.8x - 112.8R² = 0.9999

日落黄：y = 8208.5x - 171.47R² = 0.9999

诱惑红：y = 5277.5x - 5.5254R² = 0.9999

亮蓝：y = 6014.9x + 525R² = 0.9997

2.2根据噪声值并参照GB/T 21916-2008的前处理方法，按照3倍信噪比计算检出限为柠檬黄0.27mg/kg、苋菜红0.30 mg/kg、靛蓝0.30 mg/kg、胭脂红0.27 mg/kg、日落黄0.10 mg/kg、诱惑红0.12 mg/kg、亮蓝0.05 mg/kg，满足国家标准的规定。

3结论

使用上海伍丰科学仪器有限公司的EX1700型超高效液相色谱仪在安徽皖测食品检测技术有限公司开展应用，检测食品中合成着色剂，方法研究表明：线性满足大于R²＞ 0.9990，保留时间重复性其RSD≤3.0%，检出限满足有关国家标准的要求，仪器工作站操作简便，可以满足日常食品安全检测的需求。

EX1700型超高效液相色谱仪配置自动进样器，节省了实验室人工时间，提高了工作效率；特别是该仪器能够承受最高80兆帕压力，因此可以将流速提高至1.5~2ml/min，本方法中即使采用1ml/min流速，检测时间（14min）仍比普通液相色谱仪检测时间（30min）节约一半，因此工作效率和灵敏度较普通液相大幅提高。